Pet snaga:
● Instrument konfiguriran s korakom ekstrakcije nukleinske kiseline i pročišćavanja
● Instrument konfiguriran s modulom ultrazvučne ekstrakcije
● Instrument potpuno automatski konfiguriran
● Instrument konfiguriran s promjenjivim temperaturnim pojačanjem
● Instrument konfiguriran s potpuno zatvorenim kompletom reagensa
1. Trebaju li reagensi za detekciju nukleinskih kiselina biti ekstrahirani i pročišćeni?
Načelo detekcije nukleinske kiseline je sljedeće: pod djelovanjem početnice, DNA polimeraza se koristi za izvođenje lančane reakcije amplifikacije na šablonskoj DNA/RNA (zahtijeva reverznu transkripciju NA), a zatim se otkriva količina oslobođenog fluorescentnog signala da se odredi sadrži li uzorak nukleinsku kiselinu (DNA/RNA) patogena koji se treba detektirati.
1) Uzorci koji nisu ekstrahirani ili pročišćeni mogu sadržavati mnoge komponente koje utječu na konačni rezultat: nukleazu (koja može otopiti ciljnu nukleinsku kiselinu i uzrokovati lažno negativne), proteaze (koje mogu smanjiti DNA polimerazu i uzrokovati lažno negativne), teške metale sol (što dovodi do inaktivacije sintaze i uzrokuje lažno pozitivno), previše kiselo ili previše alkalno PH (što može uzrokovati neuspjeh reakcije), Nepotpuna RNA (što dovodi do lažno negativne neuspjeha reverzne transkripcije).
2) Neke je uzorke teško izravno umnožiti: Gram-pozitivni i neki paraziti, zbog svojih debelih staničnih stijenki i drugih struktura, ako ne prođu kroz proces ekstrakcije i pročišćavanja nukleinske kiseline, komplet bez ekstrakcije može biti neuspješan za takve uzorci.
Stoga se preporučuje odabir pribora za testiranje ili instrumenta konfiguriranog s korakom ekstrakcije nukleinske kiseline.
2. Kemijska ekstrakcija ili fizička ultrazvučna fragmentacijska ekstrakcija?
Općenito govoreći, kemijska ekstrakcija može se primijeniti na većinu predobrade i pročišćavanja.Međutim, kod Gram-pozitivnih bakterija debelih stijenki i nekih parazita, također je slučaj da se kemijskom ekstrakcijom ne mogu dobiti učinkoviti uzorci nukleinske kiseline, što rezultira lažno negativnom detekcijom.Osim toga, kemijska ekstrakcija često koristi jake agense, ako eluacija nije temeljita, lako je uvesti jaku lužinu u reakcijski sustav, što rezultira netočnim rezultatima.
Ultrazvučna fragmentacija koristi fizičko drobljenje, što je uspješno koristio GeneXpert, vodeće poduzeće na području POCT za ljudsku upotrebu, i ima apsolutnu prednost u ekstrakciji nukleinske kiseline nekih složenih uzoraka (kao što je Mycobacterium tuberculosis).
Stoga se preporučuje odabir kompleta za testiranje ili instrumenta konfiguriranog s korakom ekstrakcije nukleinske kiseline.a optimalno je ako postoji ultrazvučni modul za ekstrakciju.
3. Ručno, poluautomatsko i potpuno automatsko?
To je problem cijene rada i radne učinkovitosti.Trenutačno bolnice za kućne ljubimce nemaju dovoljno osoblja, a ekstrakcija i detekcija nukleinske kiseline posao je koji zahtijeva određene vještine i iskustvo.Nema sumnje da je potpuno automatski stroj za ekstrakciju i detekciju nukleinske kiseline savršen izbor.
4. Povećanje konstantne temperature ili pojačanje promjenjive temperature?
Reakcija pojačanja je veza detekcije nukleinske kiseline, a profesionalna tehnologija uključena u ovu vezu je složena.Grubo govoreći, enzimi se koriste za pojačavanje nukleinske kiseline.U procesu pojačanja detektira se pojačani fluorescentni signal ili ugrađeni fluorescentni signal.Općenito govoreći, što se ranije pojavi fluorescentni signal, to je veći sadržaj ciljnog gena u uzorku.
Amplifikacija pri konstantnoj temperaturi je amplifikacija nukleinske kiseline na fiksnoj temperaturi, dok je amplifikacija pri promjenjivoj temperaturi ciklička amplifikacija strogo u skladu s denaturacijom-žarenjem-produženjem.Provedeno je vrijeme pojačanja konstantne temperature, dok na vrijeme pojačanja varijabilne temperature uvelike utječe brzina porasta i pada temperature instrumenta (trenutačno su mnogi proizvođači bili u mogućnosti izvesti 40 ciklusa pojačanja u oko 30 minuta).
Ako su laboratorijski uvjeti dobri i zoniranje je strogo, razumno je reći da razlika u točnosti između to dvoje neće biti velika.Međutim, pojačanje s promjenjivom temperaturom će sintetizirati više proizvoda nukleinske kiseline u relativno kraćem vremenu.Za laboratorije bez strogog zoniranja i stručnog osposobljenog osoblja, rizik od istjecanja aerosola nukleinske kiseline bit će veći, lažno pozitivno javlja se kada se curenje dogodi, a koje je iznimno teško eliminirati.
Osim toga, pojačanje pri konstantnoj temperaturi također je sklonije nespecifičnom pojačanju kada je uzorak složen (relativna temperatura reakcije je niža, a što je viša temperatura ekstenzije, to je bolja specifičnost vezanja primera).
Što se tiče trenutne tehnologije, pojačanje varijabilne temperature je pouzdanije.
5. Kako izbjeći rizik od curenja produkata amplifikacije nukleinskih kiselina?
Trenutačno mnogi proizvođači odabiru PCR cijev tipa žlijezde kao reakcijsku cijev nukleinske kiseline, koja je zapečaćena trenjem, a denaturacija temperature u denaturaciji s promjenjivom temperaturom u PCR amplifikaciji s promjenjivom temperaturom doseže 90 stupnjeva
Celzijeva .Ponovljeni proces širenja toplinom i skupljanja hladnoćom veliki je izazov za brtvljenje PCR cijevi, a kod PCR cijevi sa žlijezdama relativno je lako izazvati curenje.
Poželjno je prihvatiti reakciju s potpuno zatvorenim priborom/epruvetom kako bi se izbjeglo istjecanje produkta reakcije.Bilo bi savršeno kad bi se mogao razraditi potpuno zatvoreni pribor za ekstrakciju i detekciju nukleinske kiseline.
Dakle, New Techov novi potpuno automatski stroj za ekstrakciju i detekciju nukleinske kiseline ima gornjih pet optimalnih izbora.
Vrijeme objave: 9. kolovoza 2023
